Dithiothreitol (DTT) സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു റിഡ്യൂസിംഗ് ഏജന്റാണ്, ഇത് പുതിയ പച്ച അഡിറ്റീവ് എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു.രണ്ട് മെർകാപ്റ്റാൻ ഗ്രൂപ്പുകളുള്ള (-SH) ഒരു ചെറിയ തന്മാത്രാ ഓർഗാനിക് സംയുക്തമാണിത്.ഗുണങ്ങളും സ്ഥിരതയും കുറയ്ക്കുന്നതിനാൽ, ബയോകെമിസ്ട്രിയിലും മോളിക്യുലാർ ബയോളജി പരീക്ഷണങ്ങളിലും ഡിടിടി വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.
പ്രോട്ടീനുകളിലും മറ്റ് ജൈവ തന്മാത്രകളിലും ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകൾ കുറയ്ക്കുക എന്നതാണ് ഡിടിടിയുടെ പ്രധാന പങ്ക്.പ്രോട്ടീൻ ഫോൾഡിംഗിന്റെയും സ്ഥിരതയുടെയും ഒരു പ്രധാന ഭാഗമാണ് ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ട്, എന്നാൽ കുറയ്ക്കാവുന്ന SDS-PAGE വിശകലനം, പ്രോട്ടീൻ റീകോമ്പിനേഷൻ, ഫോൾഡിംഗ് എന്നിവ പോലുള്ള ചില പരീക്ഷണാത്മക സാഹചര്യങ്ങളിൽ, സ്പേഷ്യൽ ഘടന അനാവരണം ചെയ്യുന്നതിന് രണ്ട് തയോൾ ഗ്രൂപ്പുകളായി ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ട് കുറയ്ക്കേണ്ടതുണ്ട്. പ്രോട്ടീൻ.ഡിടിടിക്ക് ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകളുമായി പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച് അവയെ മെർകാപ്ടാൻ ഗ്രൂപ്പുകളായി കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും, അങ്ങനെ പ്രോട്ടീന്റെ സ്പേഷ്യൽ ഘടന തുറക്കുകയും വിശകലനം ചെയ്യാനും കൈകാര്യം ചെയ്യാനും എളുപ്പമാക്കുന്നു.
എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനവും സ്ഥിരതയും സംരക്ഷിക്കാനും DTT ഉപയോഗിക്കാം.ചില എൻസൈം-കാറ്റലൈസ്ഡ് പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളിൽ, എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനം ഓക്സിഡൻറ് കുറയ്ക്കാം.ഡിടിടിക്ക് ഓക്സിഡന്റുകളുമായി പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച് ദോഷകരമല്ലാത്ത വസ്തുക്കളായി കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും, അതുവഴി എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനവും സ്ഥിരതയും സംരക്ഷിക്കുന്നു.
β-mercaptoethanol (β-ME) പോലെയുള്ള പരമ്പരാഗത കുറയ്ക്കുന്ന ഏജന്റുമാരുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, DTT സുരക്ഷിതവും കൂടുതൽ സ്ഥിരതയുള്ളതുമായ കുറയ്ക്കുന്ന ഏജന്റായി കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു.ഇത് ജലീയ ലായനിയിൽ സ്ഥിരത പുലർത്തുക മാത്രമല്ല, ഉയർന്ന താപനിലയിലും ആസിഡ്-ബേസ് അവസ്ഥയിലും അതിന്റെ കുറയ്ക്കുന്ന ഗുണങ്ങൾ നിലനിർത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.
DTT യുടെ ഉപയോഗം താരതമ്യേന ലളിതമാണ്.പൊതുവേ, ഡിടിടി ഉചിതമായ ഒരു ബഫറിൽ ലയിപ്പിച്ച് പരീക്ഷണാത്മക സംവിധാനത്തിലേക്ക് ചേർക്കുന്നു.ഡിടിടിയുടെ ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ നിർദ്ദിഷ്ട പരീക്ഷണം അനുസരിച്ച് നിർണ്ണയിക്കേണ്ടതുണ്ട്, ഇത് സാധാരണയായി 0.1-1mM പരിധിയിലാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്.കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയ്ക്ക് കോശവളർച്ചയിൽ പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ കുറയ്ക്കാനും ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീനുകളുടെ അമിതമായ എക്സ്പ്രഷൻ മൂലം സൈറ്റോടോക്സിസിറ്റി കുറയ്ക്കാനും കഴിയും.ഉയർന്ന സാന്ദ്രതകൾ അമിതമായ കോശ ഉപാപചയ ഭാരത്തിന് കാരണമായേക്കാം, ഇത് കോശ വളർച്ചയെയും പ്രകടനക്ഷമതയെയും ബാധിക്കുന്നു.
വിവിധ സാന്ദ്രതകളിൽ IPTG ഇൻഡക്ഷൻ ടെസ്റ്റുകൾ നടത്തി ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവൽ വിലയിരുത്തുക എന്നതാണ് ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള മാർഗം.IPTG സാന്ദ്രതകളുടെ ഒരു ശ്രേണി ഉപയോഗിച്ച് ചെറിയ തോതിലുള്ള കൾച്ചർ ടെസ്റ്റുകൾ നടത്താം (ഉദാ. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, മുതലായവ) കൂടാതെ ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവൽ (ഉദാ. വെസ്റ്റേൺ) കണ്ടുപിടിച്ചുകൊണ്ട് വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകളിലെ എക്സ്പ്രഷൻ പ്രഭാവം വിലയിരുത്താവുന്നതാണ് ബ്ലോട്ട് അല്ലെങ്കിൽ ഫ്ലൂറസെൻസ് കണ്ടെത്തൽ).പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, മികച്ച എക്സ്പ്രഷൻ ഇഫക്റ്റുള്ള ഏകാഗ്രത ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷനായി തിരഞ്ഞെടുത്തു.
കൂടാതെ, സമാനമായ പരീക്ഷണാത്മക സാഹചര്യങ്ങളിൽ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന IPTG കോൺസൺട്രേഷൻ ശ്രേണി മനസിലാക്കാൻ നിങ്ങൾക്ക് പ്രസക്തമായ സാഹിത്യമോ മറ്റ് ലബോറട്ടറികളുടെ അനുഭവമോ റഫർ ചെയ്യാം, തുടർന്ന് പരീക്ഷണ ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും ക്രമീകരിക്കുകയും ചെയ്യാം.
വ്യത്യസ്ത എക്സ്പ്രഷൻ സിസ്റ്റങ്ങൾ, ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീനുകൾ, പരീക്ഷണാത്മക അവസ്ഥകൾ എന്നിവയെ ആശ്രയിച്ച് ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ വ്യത്യാസപ്പെടാം എന്നത് ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്, അതിനാൽ ഓരോ കേസിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതാണ് നല്ലത്.
ചുരുക്കത്തിൽ, പ്രോട്ടീനുകളിലെയും മറ്റ് ജൈവ തന്മാത്രകളിലെയും ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകൾ കുറയ്ക്കുന്നതിനും എൻസൈമുകളുടെ പ്രവർത്തനവും സ്ഥിരതയും സംരക്ഷിക്കുന്നതിനും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു കുറയ്ക്കുന്ന ഏജന്റാണ് DTT.ബയോകെമിസ്ട്രിയിലും മോളിക്യുലാർ ബയോളജി പരീക്ഷണങ്ങളിലും ഇത് വ്യാപകമായി ഉപയോഗിച്ചുവരുന്നു.
പോസ്റ്റ് സമയം: സെപ്റ്റംബർ-28-2023