ഒപ്റ്റിമൽ ഏകാഗ്രത എങ്ങനെ നിർണ്ണയിക്കും?
ഇൻഡ്യൂസർ IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside)ക്ക്, ഉയർന്ന സാന്ദ്രത, മികച്ചതാണ്.ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ നിർദ്ദിഷ്ട പരീക്ഷണ സാഹചര്യങ്ങളെയും ആവശ്യമുള്ള ഇൻഡക്ഷൻ ഫലത്തെയും ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു.
സാധാരണയായി, IPTG യുടെ സാന്ദ്രത 0.1-1 mM പരിധിയിലാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്.കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയ്ക്ക് കോശവളർച്ചയിൽ പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ കുറയ്ക്കാനും ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീനുകളുടെ അമിതമായ എക്സ്പ്രഷൻ മൂലം സൈറ്റോടോക്സിസിറ്റി കുറയ്ക്കാനും കഴിയും.ഉയർന്ന സാന്ദ്രതകൾ അമിതമായ കോശ ഉപാപചയ ഭാരത്തിന് കാരണമായേക്കാം, ഇത് കോശ വളർച്ചയെയും പ്രകടനക്ഷമതയെയും ബാധിക്കുന്നു.
വിവിധ സാന്ദ്രതകളിൽ IPTG ഇൻഡക്ഷൻ ടെസ്റ്റുകൾ നടത്തി ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവൽ വിലയിരുത്തുക എന്നതാണ് ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള മാർഗം.IPTG സാന്ദ്രതകളുടെ ഒരു ശ്രേണി ഉപയോഗിച്ച് ചെറിയ തോതിലുള്ള കൾച്ചർ ടെസ്റ്റുകൾ നടത്താം (ഉദാ. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, മുതലായവ) കൂടാതെ ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവൽ (ഉദാ. വെസ്റ്റേൺ) കണ്ടുപിടിച്ചുകൊണ്ട് വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകളിലെ എക്സ്പ്രഷൻ പ്രഭാവം വിലയിരുത്താവുന്നതാണ് ബ്ലോട്ട് അല്ലെങ്കിൽ ഫ്ലൂറസെൻസ് കണ്ടെത്തൽ).പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, മികച്ച എക്സ്പ്രഷൻ ഇഫക്റ്റുള്ള ഏകാഗ്രത ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷനായി തിരഞ്ഞെടുത്തു.
കൂടാതെ, സമാനമായ പരീക്ഷണാത്മക സാഹചര്യങ്ങളിൽ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന IPTG കോൺസൺട്രേഷൻ ശ്രേണി മനസിലാക്കാൻ നിങ്ങൾക്ക് പ്രസക്തമായ സാഹിത്യമോ മറ്റ് ലബോറട്ടറികളുടെ അനുഭവമോ റഫർ ചെയ്യാം, തുടർന്ന് പരീക്ഷണ ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും ക്രമീകരിക്കുകയും ചെയ്യാം.
വ്യത്യസ്ത എക്സ്പ്രഷൻ സിസ്റ്റങ്ങൾ, ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീനുകൾ, പരീക്ഷണാത്മക അവസ്ഥകൾ എന്നിവയെ ആശ്രയിച്ച് ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ വ്യത്യാസപ്പെടാം എന്നത് ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്, അതിനാൽ ഓരോ കേസിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതാണ് നല്ലത്.
പോസ്റ്റ് സമയം: സെപ്റ്റംബർ-28-2023