4-നൈട്രോഫെനൈൽ ബീറ്റ-ഡി-ഗാലക്ടോപൈറനോസൈഡ് CAS:200422-18-0

പ്രഭാവം: ONPG എന്നത് β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് എന്ന എൻസൈമിന്റെ സാന്നിധ്യവും പ്രവർത്തനവും കണ്ടെത്താൻ പ്രത്യേകം ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റാണ്. β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് എൻസൈം സജീവമായിരിക്കുമ്പോൾ, അത് ONPG-യെ രണ്ട് ഉൽപ്പന്നങ്ങളായി വിഭജിക്കുന്നു: o-നൈട്രോഫിനോൾ, ഒരു ഗാലക്റ്റോസ് ഡെറിവേറ്റീവ്. o-നൈട്രോഫിനോളിന്റെ പ്രകാശനം മഞ്ഞ നിറവ്യത്യാസത്തിന് കാരണമാകുന്നു, ഇത് ഒരു സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് അളക്കാൻ കഴിയും.

ആപ്ലിക്കേഷൻ: മോളിക്യുലാർ ബയോളജി, ബയോകെമിസ്ട്രി ഗവേഷണങ്ങളിൽ ഒഎൻപിജിക്ക് നിരവധി ആപ്ലിക്കേഷനുകൾ ഉണ്ട്:

β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ നിർണ്ണയം: β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനം അളക്കുന്നതിനും അളക്കുന്നതിനും ONPG സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തിന് നേരിട്ട് ആനുപാതികമായ ഒ-നൈട്രോഫെനോൾ രൂപീകരണ നിരക്ക് സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിക് ആയി അളക്കാൻ കഴിയും.

ജീൻ എക്സ്പ്രഷനും നിയന്ത്രണവും: ജീൻ എക്സ്പ്രഷനുമായും നിയന്ത്രണ പഠനങ്ങളുമായും ബന്ധപ്പെട്ട പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ONPG പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട്. നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൊമോട്ടർമാരുടെ നിയന്ത്രണത്തിലുള്ള ജീനുകളുടെ എക്സ്പ്രഷൻ പഠിക്കാൻ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന lacZ ഫ്യൂഷൻ സിസ്റ്റം പോലുള്ള ഫ്യൂഷൻ പ്രോട്ടീൻ അസ്സേകളിൽ ഇത് പതിവായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. ONPG ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുന്ന ബീറ്റാ-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് പ്രവർത്തനം ജീൻ എക്സ്പ്രഷന്റെ നിലവാരത്തെക്കുറിച്ചുള്ള ഉൾക്കാഴ്ചകൾ നൽകുന്നു.

β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് പ്രവർത്തനത്തിനായുള്ള സ്ക്രീനിംഗ്: β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസിനെ എൻകോഡ് ചെയ്യുന്ന LacZ ജീനിന്റെ സാന്നിധ്യവും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും തിരിച്ചറിയുന്നതിന് റീകോമ്പിനന്റ് DNA സാങ്കേതികവിദ്യയിൽ കളറിമെട്രിക് സ്ക്രീനിംഗ് രീതിയായി ONPG ഉപയോഗിക്കാം. താൽപ്പര്യമുള്ള ജീൻ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ക്ലോണുകളെ തിരിച്ചറിയാൻ ഈ സ്ക്രീനിംഗ് രീതി സഹായിക്കുന്നു.

എൻസൈം കൈനെറ്റിക്സ് പഠനങ്ങൾ: β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് എൻസൈമിന്റെ ഗതിശാസ്ത്രം പഠിക്കുന്നതിലും ONPG ഉപയോഗപ്രദമാണ്. വ്യത്യസ്ത സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് സാന്ദ്രതകളിലെ എൻസൈം-സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് പ്രതിപ്രവർത്തന നിരക്ക് അളക്കുന്നതിലൂടെ, മൈക്കിളിസ്-മെന്റൻ സ്ഥിരാങ്കങ്ങൾ (Km) പരമാവധി പ്രതിപ്രവർത്തന നിരക്കുകൾ (Vmax) പോലുള്ള ഗതികോർജ്ജ പാരാമീറ്ററുകൾ നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയും.